BLOG INFORMATIVO

BLOG INFORMATIVO DE ENFERMERÍA

AUTOR

SELENE ESTRADA

CÁNCER DE MAMA
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SEMESTRE: SEGUNDO

PARALELO: C

TEMA: DENGUE

2019

 

RESUMEN

Presenta: Trabajo integrador. Selena Nataly Estrada Olivares.  Fecha de entrega 15/03/2019 terminación del segundo en el ISTEC

Introducción. - El dengue es la principal enfermedad arboviral transmitida por vector, la cual es ocasionada por cualquiera de los cuatro serotipos del Virus del Dengue (DENV-1-4). La OMS estima que 2.5 billones de personas se encuentran en riesgo por esta infección y que 50 millones de casos ocurren anualmente a nivel mundial. En México, durante el 2019 se reportó la circulación de los cuatro serotipos de este virus, específicamente en Nuevo León, la Secretaría de Salud reportó 2272 casos de Dengue de los cuales la mayoría se debieron a infecciones por el DENV-1. Aunque existen reportes de la vigilancia epidemiológica en el país, el reporte de los genotipos virales es limitado.

Objetivo. - Identificar y analizar las variantes genéticas de los virus del dengue circulantes, así como su asociación en la dinámica de la transmisión de estos en la provincia Sucumbíos.

Material y Métodos. - Se empleó método de Máxima Probabilidad (ML) así como un valor de soporte de 100 replicaciones para la realización del análisis filogenético de genomas virales del DENV-1 aislados durante el brote epidémico de dengue que tuvo lugar en Nueva Loja durante el 2019. .

Resultados. - Se estimó la relación filogenética de 36 genomas del DENV-1 (2019) encontrando que estos pertenecen al genotipo V América.

Conclusión. - Se logró la identificación de las variantes genéticas del DENV-1 circulantes en Nuevo León durante el 2010. Además, se determinó un 3% de prevalencia de anticuerpos antiDENV en donadores asintomáticos

I.- INTRODUCCIÓN

Muchas de las enfermedades emergentes que amenazan la salud pública mundial son transmitidas por vectores artrópodos y constituyen un problema global cuyo impacto social y económico es enorme [1, 2].

Entre los principales vectores de enfermedades se encuentran los mosquitos los cuales son capaces de transmitir: malaria, fiebre amarilla, dengue, encefalitis, filariasis y fiebre del oeste del Nilo [2-4].

Con respecto a lo anterior, el dengue es una enfermedad ocasionada por la infección con cualquiera de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV-1-4) los cuales son transmitidos al hombre por la picadura de mosquitos del género Aedes.

Ha sido señalado que el aumento en los casos de dengue puede atribuirse a tres factores principalmente, siendo el primero el incremento en la urbanización y en la densidad poblacional, lo que conduce a un aumento de sitios criaderos del vector y a un mayor contacto entre el vector y el huésped; en segundo lugar, la invasión global de los principales vectores Aedes aegypti y Aedes albopictus lo que conduce a un incremento en la distribución geográfica y la co-circulación de los cuatro serotipos del virus; finalmente, la interacción y evolución de los cuatro serotipos, resulta en un incremento en la severidad [5-9]. Por lo anterior, el dengue se considera como la enfermedad viral transmitida por mosquitos de más rápida distribución en el mundo, lo que aunado con su severidad la ha llevado a convertirse en la infección arboviral más común en regiones tropicales y subtropicales del mundo [7, 10-12].

La Organización Mundial de la Salud estima que anualmente ocurren 50 millones de infecciones y que aproximadamente 2.5 billones de personas que viven en zonas endémicas se encuentran en riesgo de contraer la infección cada año [10].

III.- JUSTIFICACIÓN

El comportamiento endémico de la fiebre por dengue, así como el incremento en el número de casos de dengue hemorrágico en México durante los últimos años han generado gran preocupación en todos los sectores relacionados con la salud.

Los esfuerzos para interrumpir la transmisión se han concentrado en el control vectorial; por lo que resulta importante establecer con claridad cuáles son los elementos determinantes de la transmisión del dengue para establecer medidas de control y vigilancia eficaces.

Dado que entre los factores de riesgo para el desarrollo de las formas graves de la enfermedad por el virus del Dengue se encuentran el factor inmunológico el cual está representado por la inmunidad pre-existente dada por una infección previa con el virus así como el genotipo viral infectante es de suma importancia la evaluación de estos factores.

En cuanto a los determinantes moleculares de la transmisión, el análisis filogenético de las variantes genéticas del DENV ofrecerían una visión más clara de la relación entre las variantes existentes y la severidad de la enfermedad en nuestra población.

  OBJETIVOS

1.- Objetivo general

Identificar y analizar las variantes genéticas de los virus del dengue circulantes, así como su asociación en la dinámica de la transmisión de esta provincia.

2.- Objetivos específicos

2.1.- Aislar e identificar las variantes genéticas del virus del dengue circulantes en Nueva Loja en el período de marzo del 2019 a Diciembre del 2019.

2.2.- Determinar la memoria inmunológica existente en habitantes del cantón de Nueva Loja, ecuador contra el virus del dengue en periodos epidémicos e interepidémicos.

2.3.- Analizar las variantes genéticas del virus del dengue aisladas y su asociación con la dinámica de la transmisión en las áreas estudiadas.

 II.- ANTECEDENTES

1.- Los virus

Los virus como patógenos causantes de enfermedades en el hombre se pueden encontrar en muchas páginas de la historia de la humanidad ya que han sido causales de un gran número de epidemias a lo largo de la historia universal.

Hasta fines del siglo XIX se conocía la etiología de muchas enfermedades infecciosas, sin embargo para un gran número de enfermedades no solo del hombre sino de plantas y animales permanecía sin identificarse el agente causal, siendo hasta el siglo XX que se descubrieron a los virus como causantes de enfermedades infecciosas.

Las primeras características diferenciales de los virus con respecto a otros agentes infecciosos fueron: el tamaño, estimado por su capacidad de atravesar filtros que retienen a las bacterias y la incapacidad para reproducirse en medios biológicos inertes, requiriendo para su propagación de animales o cultivos celulares, características que actualmente no son exclusivas de estos agentes.

Según su definición los virus son parásitos intracelulares obligados de tamaño submicroscópico. Sin embargo, para contar con una definición adecuada es necesario adicionar algunas cláusulas adicionales como que las partículas virales son producidas a partir de componentes ensamblados o preformados, no crecen o se someten a división, esto en comparación con otros agentes que crecen por un incremento de la suma integrada de sus componentes y se reproducen por división. Además, los virus carecen de información genética que codifica para el aparato necesario para la generación de energía metabólica o para la síntesis de proteínas por lo que depende absolutamente de la célula huésped para su funcionamiento [13].

 

1.2.- Flavivirus

De acuerdo al Comité Internacional de Taxonomía de Virus (ICTV), los Flavivirus (del latín flavi ‘amarillo’), comprenden uno de los tres géneros que componen la familia viral Flaviviridae la cual comprende alrededor de 70 virus envueltos cuyo genoma está constituido por ARN de polaridad positiva, los otros dos son los géneros Pestivirus (del latín pestis ‘plaga’) y Hepacivirus (del griego hepar, hepatos ‘hígado’), aunque estos últimos poseen estrategias de replicación similares a las de los flavivirus, estos grupos son antigénicamente distintos, no son transmitidos por artrópodos y representan linajes que divergieron tempranamente en la evolución de esta familia viral [14]. Por otro lado, se sabe con certeza a través de la evidencia geográfica que el progenitor de las aproximadamente 80 especies que constituyen el género Flavivirus surgió en África [15].

Con el curso de la especiación, los flavivirus han mostrado una diversificación substancialmente ecológica, lo cual se puede evidenciar con las diversas formas de transmisión de los diferentes linajes de los flavivirus, ya que estudios filogenéticos del género sugieren que el ancestro pudo haber sido un virus de mosquitos solamente el cual, posteriormente adquirió la habilidad de infectar vertebrados, los demás flavivirus se dividen en virus transmitidos a vertebrados mediante vector, cuyos mayores grupos emplean garrapatas y mosquitos para su transmisión horizontal, y otro grupo el cual infecta vertebrados sin el uso de artrópodos vectores. Lo anterior no sugiere si los transmitidos por vector o sin vector fueron ancestrales pero la posición de los virus que infectan solamente mosquitos sugiere que la transmisión a través de mosquitos a los vertebrados precedió a la perdida de la transmisión por vector. La transmisión a través de garrapatas pudo haber evolucionado del linaje transmitido por mosquitos después de que el linaje que infecta solo vertebrados surgió [15].

A la fecha todos los flavivirus conocidos como patógenos de humanos son transmitidos por vectores, y con la excepción de los virus del Dengue.

De las proteínas estructurales, la glicoproteína de envoltura es esencial para la entrada viral a la célula ya que contiene el sitio de unión para el aún no identificado receptor celular, dentro del endosoma la proteína de envoltura.

2.- Perspectiva histórica del Virus del Dengue (DENV)

La fiebre del dengue es posiblemente tan antigua como la humanidad, el registro más antiguo encontrado hasta la fecha de la enfermedad por dengue se encuentra en una enciclopedia china de síntomas y remedios de enfermedades, la cual fue publicada por primera vez durante la dinastía China (265 a 420 d.C.) y editado oficialmente en el 610 d.C. (dinastía Tang), y nuevamente en 992 d.C. (dinastía Sung del Norte). La enfermedad fue nombrada por los chinos como envenenamiento del agua y se pensaba que de alguna manera estaba relacionada con los insectos voladores asociados al agua [9].

Aproximadamente dos mil años después, los primeros brotes de una enfermedad compatible con la fiebre de dengue clásico tomo lugar en el Caribe en 1635 y 1699, mucho antes de que se reportaran las epidemias de 1779 y 1780 que se produjeron simultáneamente en Asia, África y Norte América. Estos acontecimientos describieron por primera vez evidencia de la amplia distribución geográfica de esta (o al menos de una enfermedad muy similar al dengue), alcanzando proporciones pandemicas para 1788. Siendo en 1789 cuando Benjamin Rush reportó el primer caso de la enfermedad y acuño el termino de ‘fiebre quebrantahuesos’[8]. Los registros históricos también indican una segunda serie de pandemias de dengue o enfermedades similares a dengue que cruzaron el mundo de África a India a Oceanía y a América, de 1823 a 1916, con una duración de 3 a 7 años [17]. Interesantemente, esta amplia distribución geográfica del dengue coincidió con el aumento en el comercio global ayudado por los barcos de vela.

Desde entonces, grandes brotes se han reconocido mundialmente cada 20-40 años. La ausencia de dengue epidémico de 1946 a 1963 puede ser atribuido al éxito parcial de los programas de erradicación de Aedes aegypti diseñados para la prevención de la fiebre amarilla [5, 8, 18, 21].

La segunda guerra mundial causó cambios ecológicos y demográficos significativos, hipnotizándose que el movimiento de tropas y civiles, el aumento en el número de individuos susceptibles en áreas endémicas, la destrucción del ambiente, el transporte de carga, la expansión económica, la continua.

4.- Transmisión

4.1.- Agente etiológico

La partícula madura del virus del dengue es esférica con un diámetro de 50 mm que contiene múltiples copias de las tres proteínas estructurales, la membrana derivada del huésped y una sola copia del genoma de ARN de cadena sencilla y sentido positivo [10].

El genoma del virus consta de 10,703 nucleótidos, los cuales se traducen para generar una poliproteína precursora (figura 9) la cual es co- y pos-traduccionalmente procesada por proteasas virales y celulares para producir las proteínas virales que son tres proteínas estructurales (cápside C, el precursor de membrana  que dará origen a la proteína M, la proteína de envoltura (E) y siete proteínas no estructurales.

El Virus del dengue se clasifica en cuatro serotipos (DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4) los cuales difieren en aproximadamente el 30% de los nucleótidos a través de su genoma [27]. Debido a lo anterior, distintos genotipos o linajes (virus altamente relacionados en su secuencia nucleotídica) se han identificado dentro de cada serotipo, lo que resalta la extensa variabilidad genética de los serotipos del dengue. Sin embargo, los virus transmitidos por artrópodos (Arbovirus) han mostrado menores tasas de mutación comparados con virus que infectan directamente a humanos como la Influenza, HIV o Coronavirus, probablemente debido al efecto de compensación que se produce debido a que el virus está obligado a adaptarse alternativamente en el vector invertebrado y el hospedero vertebrado.

4.2.- El vector

El principal vector del virus del dengue es el mosquito Aedes aegypti, el cual es una especie antropofílica de distribución cosmotropical que se presenta en todo el mundo dentro de los isotermas de 20 °C, la cual está bien adaptada al ambiente urbano, pudiéndose encontrar afuera en la proximidad o adentro de las viviendas humanas. Su eficiencia como vector radica en que este deposita sus huevos en contenedores artificiales de agua limpia como neumáticos, latas, frascos, macetas entre otros, y que se alimenta por picadura de la sangre de humanos las cuales son por lo general durante la mañana o al atardecer [21, 35].

En cuanto a su descripción morfológica, Aedes aegypti  es un mosquito de color negro con anillos blancos en las patas y una figura de color blanco plateado en forma de lira en la parte superior de su tórax, también posee bandas blancas en los tarsos posteriores y el abdomen [35].

Por otra parte el mosquito Aedes albopictus (figura 11) es el vector secundario del virus del dengue en el sureste de Asia, el pacífico occidental y crecientemente en Centroamérica y Sudamérica [21]. Tiene una apariencia muy similar a la de Aedes aegypti con un cuerpo negro y marcas blancas en las patas, la diferencia principal entre los dos es que A. albopictus tiene una sola línea blanca-plateada en el centro del dorso del tórax [35].

4.3.- El hospedero

Los humanos son los principales hospederos amplificadores del virus. El virus circulante en la sangre de humanos virémicos es ingerido por mosquitos hembras durante su alimentación. El virus infecta el intestino medio del mosquito y subsecuentemente se distribuye sistemáticamente durante un periodo de 8-12 días. Después de este periodo de incubación extrínseca, el virus puede ser transmitido a otros humanos durante las siguientes alimentaciones. El periodo de incubación extrínseco está influenciado en parte por condiciones ambientales, especialmente la temperatura ambiente. A partir de entonces el mosquito permanece infectivo por el resto de su vida.

5.- Clasificación de caso de Dengue / Manifestaciones clínicas

Según la Organización Mundial de la Salud (WHO), el dengue tiene un amplio espectro de presentaciones clínicas, a menudo con una evolución clínica y desenlace  impredecible. Mientras que la mayoría de los pacientes se recuperan después de un curso clínico autolimitado y no severo, una pequeña proporción progresa a enfermedad severa, mayormente caracterizada por fuga plasmática con o sin hemorragia. La rehidratación intravenosa es la terapia de elección; esta, puede reducir la tasa de casos fatales de las formas severas a menos de 1%. La progresión de enfermedad no-severa a severa es difícil de definir, pero es un asunto importante ya que el tratamiento apropiado puede prevenir que estos pacientes desarrollen condiciones clínicas mas severas [10].

En cuanto a las manifestaciones clínicas, la infección con cualquiera de los serotipos del virus puede ocasionar un amplio rango de enfermedades en humanos, entre las que se encuentran: infecciones asintomáticas, subclínicas, fiebre del dengue (dengue clásico) es una enfermedad febril debilitante y autolimitada que tiene entre sus manifestaciones clínicas: dolor de cabeza, dolor retro-orbital, mialgia, artralgia y rash, la cual rara vez amenaza la vida, o las formas severas que son el dengue hemorrágico el cual se caracteriza por el incremento en la permeabilidad vascular (fuga de plasma), además de presentarse trombocitopenia y manifestaciones hemorrágicas y el síndrome de shock por dengue el cual ocurre cuando la fuga de fluidos a los espacios intersticiales resulta en shock hipovolémico el cual sin tratamiento apropiado puede conducir a la muerte para las cuales la tasa de casos fatales varia de 1 al 5% [21, 36, 37]. El periodo de incubación varia de 3 a 14 días (promedio 4-7 días). En áreas donde el dengue es endémico, la enfermedad es a menudo clínicamente inespecífica. 

ÁREA DE ESTUDIO

El área de estudio estuvo comprendida por el estado de Nueva Loja el cual se encuentra en la cabecera cantonal Tiene una superficie de 64,220 km2, lo cual representa el 3.3% de la superficie total del país.

Cuenta con una población de 4,199,292 lo que representa aproximadamente el 4.0% de la población total del país.

El clima es principalmente caluroso y húmedo, pero tiene temperaturas templadas en las áreas más altas, heladas en invierno y una fuerte temporada de lluvias a veces acompañada de huracanes.

VI.- METODOLOGÍA

Para cumplir con el objetivo de este trabajo se siguió la metodología descrita en este apartado y esquematizada.

Destacando que para el control de calidad de los procedimientos aquí descritos se utilizaron controles positivos y negativos, así como valores de referencia.

a) Cero tipificación Control positivo: Sueros positivos para los diferentes serotipos o cultivos celulares infectados con los diferentes serotipos del virus del dengue. Control negativo:

Agua Valores de referencia para PCR: Muestras con menores o iguales a 35 son positivas.

Muestras con entre 36 y 38, se repiten por duplicado. Muestras con mayores o iguales a 40 son negativas. PCR gen E Todas las muestras de pacientes deberán correrse a la par con controles negativos y positivos y se excluyeron los resultados en los que:

 a) El control positivo no presente las bandas de amplificación del tamaño esperado.

 b) El control negativo presente cualquier banda de amplificación.

c) Cuando no se corra cualquiera de los controles especificados.

1.- Pruebas moleculares 1.1.- Muestras biológicas

La muestra para utilizar fue suero de pacientes febriles que presenten a su vez dos o más signos de infección por virus del Dengue según la clasificación descrita en la NOM017SSA2-1994.

A cada uno de los pacientes incluidos en el estudio, se les tomo una muestra de sangre (~5 mL) en tubos vacutainer al vacío usando tubos sin anticoagulante para suero (tapa roja), se separó el suero y se almacenó de 2 a 8°C hasta 72 horas o congeló a –70°C o menor. En caso de que se requiriera el transporte de la muestra, fue en red fría de 2 a 8°C o congelada.

1.2.- Determinación del antígeno viral (NS1) por ELISA

El suero de pacientes sospechosos de la infección con dengue fue posteriormente sometido a una prueba serológica de ELISA para la detección de la proteína no estructural del virus NS1 mediante el kit comercial PanBio No. catálogo E-DEN01P. Siguiendo las recomendaciones del fabricante descritas a continuación: 1.-Colocar 100 µl de muestras diluidas y controles en sus respectivos micropozos. 2.-Cubrir la placa e incubar por 1 hora a 37°C ± 1°C.

3.-Lavar seis (6) veces con buffer de lavado diluido. 4.-Colocar 100 µl de HRP conjugado anti-NS1 Mab a cada pozo. 5.-Cubrir la placa e incubar por 1 hora a 37°C ±1°C. 6.-Lavar seis (6) veces con buffer de lavado diluido. 7.-Colocar 100 µl de TMB a cada pozo. 8.-Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente (20-25°C) a partir de la primera adición. Se desarrollara un color azul. 9.- Agregar 100 µl de solución de paro a todos los pozos en la misma secuencia y tiempo sincronización de la adición de TMB. Mezclar bien. El color azul cambiara a amarillo. 10.- Dentro de 30 minutos leer la absorbancia de cada pozo a una longitud de onda de 450 mm con un filtro de referencia entre 600-650 mm.

Una vez que se determinó la presencia del antígeno viral NS1 se procedió a la confirmación y serotipificación por q PCR y PCR.

.- DISCUSIÓN

La Secretaria de Salud reportó la circulación de los cuatro serotipos del virus del Dengue durante el 2018 en lago agrio. También en otros países latinoamericanos se han reportado los 4 serotipos, lo que favorece la incidencia de más casos de infecciones secundarias, y en consecuencia, un aumento del riesgo de DH/SSD.

Por otro lado, se ha reportado que cada 3 a 4 años una reducción de la incidencia es inmediatamente seguida por 2 ó 3 años de aumento del número registrado de pacientes. Este mismo patrón se refleja en los casos reportados en los panoramas epidemiológicos de dengue del 2018 al 2019 por la SSA en Nueva Loja.

.- CONCLUSIONES

La caracterización genética del DENV es un parámetro de gran importancia para entender los patrones epidémicos de distribución viral.

La relación filogenética de las 36 cepas aisladas de DENV-1 durante el 2018 y

analizadas en este estudio demuestra que pertenecen al genotipo V América-África. Además se observó que estas se agruparon 3 diferentes linajes de DENV-1 que cocircularon durante el 2018.

El análisis de los linajes que co-circularon en 2018, utilizando la información

Epidemiológica de los casos, demostró que el linaje 1 comprende 8 aislados los cuales se relacionaron con secuencias de  ecuador del 2018 lo anterior es soportado por un valor de bootstrap de 67, anidado a este linaje se encontró un linaje número dos el cual comprendió la mayoría de los aislados (21) con un valor de soporte de 89 y por último se encontró un tercer linaje el cual esta soportado por un bootstrap de 100 el cual incluyo 9 aislados, los cuales provenían de casos mayoritariamente de Nueva Loja.

más información aqui :video del dengue

.-                                                        BIBLIOGRAFÍA

1. Lavezzo, L.C., et al., Arboviruses in blood donors: a study in the Amazon region and in

a small city with a dengue outbreak. Transfus Med, 2010. 20(4): p. 278-9.

2. Weaver, S.C. and W.K. Reisen, Present and future arboviral threats. Antiviral Res, 2010.

85(2): p. 328-45.

3. Kuno, G., et al., Phylogeny of the genus Flavivirus. J Virol, 1998. 72(1): p. 73-83.

4. Clyde, K., J.L. Kyle, and E. Harris, Recent advances in deciphering viral and host

determinants of dengue virus replication and pathogenesis. J Virol,  2006. 80(23): p.

11418-31.